我们在实验过程中,经常被该如何设计实验而困扰,不知从何下手开展实验,细胞实验作为被经常用到的体外实验,在科研工作中占有很大的比例。下面就盘点一下实验室常用的细胞实验技术

1细胞增殖

  常用来检测细胞增殖的方法是CCK8法和Brdu法。CCK8主要通过分光光度计进行检测,OD只越高,说明存活的细胞越多,增殖能力强。Brdu是一种胸腺嘧啶核苷类似物,

能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中,最后通过荧光强度的变化来判定细胞的增殖能力。

CCK8法

Brdu法

2 流式细胞术检测细胞的周期和凋亡

细胞周期指细胞从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。当细胞生长受到阻滞时,流式细胞周期可以判定细胞阻滞于哪个时期。

将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。Annexin V标记早期凋亡,PI标记晚期凋亡和死亡。

3 细胞划痕实验

细胞划痕实验是研究细胞在体外迁移的方法之一。模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”,在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口,以及比较图像以确定细胞迁移速率。

  4 克隆形成实验 

克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一,细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量,可以反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞。

软琼脂克隆形成                                                          平板克隆

 5 细胞小室实验 

细胞小室实验有细胞侵袭和迁移两种,两种实验的差别主要时侵袭实验增加了基质胶(Matrigel)。滤膜孔径一般为8um,而且膜孔都被Matrigel覆盖,细胞不能自由穿过,必须分泌水解酶,并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel 的滤膜。两种小室都可以考察细胞的运动和侵袭能力。

6 小管形成实验

小管形成实验是测量在体外血管生成一种快速的,可量化的方法。内皮细胞结合条件培养基并接种于基底上,易形成三维网状结构。之后通过软件对小管结果进行定量分析。 

7 细胞成球实验

成球能力是肿瘤干细胞体外鉴定的一个重要方法。其判断的是单个细胞在合适的条件培养基中自我更新的能力,一般用细胞球形成效率(SphereFormation Efficiency,SFE)表示。

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