一、中性粒细胞吞噬功能检测

中性粒细胞吞噬异物颗粒NBT(硝基四氮唑盐)后,胞内葡萄糖分解能力増强,葡萄糖氧化脱氢而使NBT还原为蓝紫色颗粒沉积于细胞浆内,镜下对胞内有蓝紫色沉着物的白细胞计数,求出其占白细胞总数的百分率,即代表中性粒细胞吞噬杀菌功能。

1. 材料

pH 7.2磷酸盐缓冲液、NET染液(NBT 0.2g、聚蔗糖20mg溶于100mL磷酸盐缓冲液中)、肝素抗擬血、甲醇、Wright-Giemsa染液、显微镜、恒温箱等。

2. 操作方法

1) 于清洁玻片上滴加肝素抗凝血及NBT染液各两滴,置湿盒内37℃孵育15min;

2)室温放置15min,并轻轻摇勾,将玻片上的待检样品制成血涂片,干燥后用甲醇固定;

3)用Wright - Giemsa染液染色,镜下观察计数。

3. 结果观察

如图1所示:镜下观察计数100个白细胞中有蓝紫色沉淀物的白细胞数,即得百分率。

图1 中性粒细胞吞噬功能检测实验

二、巨噬细胞吞噬功能检测

巨噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性,将鸡红细胞注入小鼠腹腔内,其内巨噬细胞即将鸡红细胞吞入。取腹腔液经涂片、染色后,可见鸡红细胞被吞噬的现象,计数100个吞噬细胞中吞噬鸡红细胞的细胞数即可判断其吞噬功能。

1. 材料

1%的鸡红细胞悬液、小白鼠、6%可溶性淀粉肉汤(肉汤培养液100ml加入

可溶性淀粉6g,混匀后煮沸灭菌备用)、瑞氏染液、解剖器械、无菌注射器、显微镜等。

2.操作方法

1)试验前3d,给小鼠腹腔内注射6%可溶性淀粉肉汤ImL;

2)试验当天给小鼠腹腔内注射0.5mL鸡红细胞悬液,注射后30min颈椎脱臼处死小鼠,取其腹腔液涂片,瑞氏染色,镜下观察。

3.结果观察

如图2所示:镜下可见未被吞噬的鸡红细胞胞浆呈红色,核被染成蓝色;数量较多、体积较大,圆形或不规则的细胞,其表面有许多似毛刺状的小突起(伪足),胞质中有数量不等的红色颗粒(为被吞噬的鸡红细胞,多观察不到核,且形态变圆)即为巨噬细胞。计数100个吞噬细胞,计算吞噬阳性细胞百分率。

图2 巨噬细胞吞噬功能检测实验

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