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干货分享 | 试验动物的采血方法

一、大、小鼠割(剪)尾采血


当取血量较少时采用本法。采血前将鼠尾部浸在50℃左右温水中数分钟或用大功率灯泡照射数分钟,麻醉动物,使尾部血管充盈。用75%酒精擦拭鼠尾,用锋利的刀片在尾部作一横切口,割破尾静脉或动脉,让血液自由滴入盛器或用毛细吸管吸取,采血结束,伤口消毒并压迫止血。若多次取血,最好从鼠尾末端开始。小鼠每次可取血0.1ml左右,大鼠每次可取血0.3~0.5ml。若只需要几微升血量,可用锐器(刀或剪刀)垂直割去尾尖1-2 mm,用毛细吸管吸取血液。使用肝素处理过的毛细吸管,或将小鼠尾部放入肝素处理过的离心管内,可增加取血量。该方法可反复多次使用。安全可行的取血量和取血频率取决于鼠的总血量(50-70ml/kg),一般来说,每2-4周可取10%的循环血量,每24h可取1%的循环血量(参考《Manipulating the Mouse Embryo-A Laboratory manual 4th edition》P230)。

二、眼眶静脉丛(窦)取血


将动物麻醉后,取侧卧位放在一平面上,用食指和拇指压迫颈部两端使头部静脉血液回流困难,眼球突出。通常用硬质毛细玻璃管或巴斯德玻璃吸管,与鼠面部呈45°夹角,由眼内角刺入眼睑和眼球之间,向眼底部方向移动,稍加旋转以切开静脉丛。一般刺入深度为小鼠约2~3mm、大鼠约4~5mm,刺入出血后,将取血管边推边抽。取到所需的血量后,即除去加于颈部的压力,同时将采血器拔出。为防止术后穿刺孔出血,用消毒纱布压迫眼球30秒。若手法得当,体重20~30g的小鼠每次可采血0.2~0.3ml,体重200~300g的大鼠每次可采血0.4~0.6ml。

三、摘眼球取血法


本法多用于小鼠,所采血液为眶动脉和眶静脉的混合血,一般可采集小鼠体重4%~5%的血量。操作前应深度麻醉小鼠,将小鼠侧卧位置于平面上,用食指和拇指压迫眼周皮肤,是眼球突出充血,用眼科镊迅速夹去眼球,并将鼠倒置,头向下,可适当从身体后侧向眼部按摩小鼠躯体,使眼眶内血液流入事先准备好的收集管。此法只能一次采血,如需反复多次采血样时,则不能采用这种方法。

四、大(小)鼠心脏采血


大(小)鼠麻醉后,仰卧位固定,剪去胸前区被毛,皮肤消毒后,用左手食指在左侧第3-4肋间触摸到心搏处,右手持带有4-5号针头的注射器,选择心搏最强处垂直向下穿刺,当刺中心脏时,血液会自动进入注射器。每次采血量0.5-0.6mL。除此之外,也可侧卧位穿刺或仰卧位沿胸骨水平纵向进针。心脏采血注意要点:

①要迅速而直接插入心脏,否则,心脏将从针尖移开;

②如第一次没刺准,将枕头抽出重刺,不要在心脏周围乱探,以免损伤心、肺

③要缓慢而稳定地抽吸,否则太多的真空反而使心脏塌陷。若血流阻断,可轻轻旋转针头或稍微抽出针头。若不需保留动物存活时,也可麻醉后切开动物胸部,将注射器直接刺入心脏抽吸血液。操作时,先将动物深度麻醉,然后将其固定在鼠板上,剖开胸腔,然后将注射器针头刺入右心室后立即抽血。开胸时,要尽可能减少出血。

五、大血管采血


大、小鼠可从股动(静)脉、腋下动(静)脉、颈动(静)脉或腹主动脉采血。在这些部位采血需麻醉后固定动物,然后做动(静)脉分离手术,使其暴露清楚后,用注射器沿大血管平行方向刺入,抽取所需血量。

六、兔耳缘静脉采血


多用于家兔等动物的中量采血,可反复采取。操作时,将兔固定于兔盒内或由助手固定,选静脉较粗、清晰的耳朵,拔去采血部位的被毛,消毒。为使血管扩张,可用手指轻弹或用二甲苯涂擦血管局部(进行血细胞计数则不宜用二甲苯)。用6号针头沿耳缘静脉远心端刺入血管。若所需血液较少,可用锋利刀片在血管上作一切口或用针头刺破血管即可。取血后,用棉球压迫止血。兔用此法一次可采血5~10ml。

七、兔耳中央动脉采血


固定兔后,一手固定兔耳,一手持注射器,在中央动脉末端,沿动脉平行的方向刺入动脉,刺入方向应朝向近心端。一般用6号针头采血。取血完毕后注意止血。此法一次可取血10~15ml。注意:兔的习性胆小易惊,其外周血液循环对外界环境刺激极为敏感,耳中央动脉易发生痉挛性收缩。因此,抽血前必须让兔耳充血,并赶在动脉扩张,而未发生痉挛性收缩前立即抽血。若注射针刺入后尚未抽血,血管已发生痉挛性收缩,应将针头放在血管内固定不动,待痉挛消失血管舒张后再抽。若在血管痉挛时强行抽吸,会导致管壁变形,针头易刺破管壁形成血肿。

八、兔心脏采血


将兔麻醉后,仰卧固定。在左侧胸部心脏部位去毛,消毒。用左手触摸左侧第3~4肋间,选择心搏处穿刺(胸骨左缘外3mm处),进针后针头偏向胸骨,与水平面呈45°夹角,或沿剑突尾端缘和腹面平面呈30°角向头端刺入。抽出所需血量后,应迅速拔针,用手指紧压术部并消毒。一次取血不超过20~25ml。注意:采血动作宜迅速,以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固或溶血,采血一般可选择8号针头,采血中回血不好或动物躁动时应拔出注射器,重新确认后再次穿刺采血。一般经6~7天,可重复进行心脏采血。

九、背跖静脉采血


背跖静脉采血主要用于豚鼠。背跖静脉有两根:外侧跖静脉和内侧跖静脉,均可用于采血。操作时,由助手固定动物,并将其后肢膝关节伸直到操作者面前,操作者将动物脚面用酒精消毒,并找出外侧或内侧跖静脉后,以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端,右手拿注射器刺入静脉采血。拔针后立即出血,并可见刺入部位呈半球隆起,应用纱布或脱脂棉压迫止血。反复取血时,两后肢交替使用。

十、犬前、后肢皮下浅层静脉采血


此法在犬使用最广泛。前后肢皮下千层静脉主要包括:前肢内侧皮下头静脉、后肢外侧小隐静脉。将动物侧卧固定,减去采血部位的被毛,用碘酒、酒精消毒皮肤,用胶皮带扎紧或用手抓紧静脉近心端,使血管扩张,使用6号或7号针头的注射器从静脉远心端水平刺入血管,抽取时速度要稍慢,以防抽瘪血管。当针头插入血管后,应解除静脉上端加压的手或胶皮管。取血完毕后,应注意止血。如只需较少血量,可直接用针尖穿刺,再用玻片接住或用滴管吸取。

十一、犬颈静脉采血


从外周静脉小的犬采大量血时最好选择颈静脉。通常一人固定犬,另一人采集血样。将动物侧卧固定,使颈伸直并稍向一侧歪。减去颈部被毛,消毒。对颈基部施加压力可阻止静脉回流,即可看见血管。用连有7号针头的注射器,针头平行血管向头部刺入血管。由于此静脉在皮下易于滑动,针刺时除用左手固定好血管外,刺入要准确。取血后注意压迫止血。本法一次可采集较多血。

十二、犬心脏采血


将动物麻醉后,仰卧固定,前肢向背侧方向固定,暴露胸部,剪去左侧第3~5肋间的被毛,消毒。用左手探摸,确定搏动最强处。右手持连有7号针头的注射器。一般选择胸骨左外缘1cm处,于第3~4肋间穿刺。穿刺时,可随针头接触到心脏跳动的感觉,调整刺入方向和深度,但不能让针头在胸腔内乱晃。当穿刺正确时,血液自动流入注射器。本法可抽取大量血液。

十三、猪耳大静脉


当需中量或少量血时采用。将动物固定后,用酒精、碘酒消毒。用力擦拭猪耳,可清晰见到耳缘静脉,用连有6号针头的注射器直接抽取。注意抽吸速度不要太快,因猪耳皮肤较厚,应选择锐利的针头。另外,可用刀片切开静脉,用滴管等物吸取。取血后注意压迫止血。

十四、猪心脏采血


基本方法同啮齿类动物的心脏采血。因猪的胸部肌肉较厚,应使用心脏穿刺针。仰卧固定,剃毛,消毒。左手探摸,在左3~4肋间处,右手持连有心脏穿刺针的注射器。如第一次没有成功,则拔出后重新穿刺。完毕后压迫止血。本法可采集大量血液。

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