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干货分享 | 一文了解免疫组化(IHC)是什么?

免疫组化(immunocytochemistry,IHC)可以用来确定组织细胞内的抗原,对其进行定位、定性及相对定量的研究。免疫组化在病理诊断上的应用是在上个世纪七十年代开始的,目前其在病理诊断中的应用非常广泛,其已是组织形态学研究中不可或缺的一部分。

免疫组化的原理


免疫组化的原理是依赖抗原和抗体之间的特异性结合标示靶点分子。先将组织细胞或细胞中的某一种化学物质提取出来作为抗原,通过免疫动物后获得特异性抗体,在以此抗体去探测组织或细胞中的同类抗原物质。由于抗原与抗体是透明无色的,故需要借助于组织化学的方法将抗原-抗体结合的部位显现出来,以达到对组织或细胞中的未知抗原进行定位,定性及相对量的研究。

免疫组化的方法


采用免疫组化染色法,具体步骤为:

  1. 常规制备涂片制备

  2. TBS缓冲液洗涤5min*3次

  3. 第一抗体,4℃冰箱过夜

  4. TBS缓冲液洗涤,5min*3次

  5. 第二 抗体,37℃,30min

  6. TBS缓冲液洗涤,5min*3次。⑦ S-P复合物,37 ℃,30min

  7. TBS洗涤液洗涤,5min*3次

  8. DAB显色

  9. 流水洗涤

  10. 苏木素复染,酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。结果判定:细胞膜、胞浆或胞核内出现棕黄色颗粒为阳性(+);深棕色颗粒为强阳性(++);未显色者为阴性(-)


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