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PCR新手必看:区分各种PCR


最近学习定量PCR和数字PCR,然后就遇到各种PCR技术,PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR和ddPCR,有几个长得好像,怎么区分呢?今天一举搞定它。


01、普通PCR


PCR是普通PCR,以双链DNA为模板,以dNTP为底物,特异性地扩增双链DNA。然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行检测,只能做定性分析。

02、实时荧光定量PCR


qPCR和Real-time PCR是实时荧光定量PCR,以cDNA为模板,以dNTP为底物,对扩增出的DNA进行定量分析。实时荧光定量PCR常用的方法:水解探针法和荧光染料法。

03、逆转录PCR


RT-PCR 是逆转录PCR,采用 Oligo(dT) 或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA,再以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增,结果只能定性,不能定量。

04、实时荧光定量逆转录PCR


RT-qPCR是实时荧光定量逆转录PCR,是qPCR+RT-PCR的组合,将总RNA或mRNA逆转录成cDNA后再作为模板,以dNTP为底物,进行qPCR的定量分析。

05、数字PCR


dPCR是数字PCR即三代PCR,是一种能够实现核酸绝对定量的精准检测技术,基于泊松分布原理将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元(纳升级)中,使每个反应室中平均只有一个拷贝或者没有目标DNA分子,然后加入荧光信号进行扩增,从而实现靶标核酸分子的绝对计数,提高检测灵敏度和准确度。

Q

各种PCR的全称


A:

① 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)

②实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)

③ 逆转录PCR(RT-PCR)

④实时荧光定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR)

 数字PCR(Digital PCR,Dig-PCR,dPCR)


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