|
实验干货 | 常用分子生物学技术原理1. 分子杂交与印迹技术 （1）探针是经过特殊标记，能与待测单链核酸分子互补结合的已知核酸片段 （2）印迹是将电泳分离后的大分子转印到硝酸纤维素膜上，以便杂交的技术 （3）DNA印迹：Southern blotting，用于检测基因组DNA （4）RNA印迹：Northern blotting，主要用来检测mRNA的表达水平 （5）蛋白质印迹：Western blotting，用于检测蛋白质的水平 2. PCR技术 （1）反应体系：单链DNA模板、特异性DNA引物、耐热DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶）、dNTPs底物、含Mg2+的缓冲液。 （2）反应步骤：变性、复性、延伸 （3）逆转录PCR：即RT-PCR，在PCR之前先将单链mRNA逆转录成cDNA。这是目前从RNA水平出发研究基因表达或获得目的基因最有效的方法。 （4）应用：目的基因的克隆、基因的体外突变、微量DNA或RNA扩增、DNA序列测定、基因突变分析 3. 蛋白质相互作用研究 酵母双杂交技术、CoIP 4. DNA-蛋白质相互作用 电泳迁移率变动分析（EMSA）、染色质免疫沉淀技术（ChIP） 5. 基因敲除 即gene knock-out，通过同源基因重组原理使得某个基因活性丧失，从而研究该基因功能的方法 |
