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实验技巧 | 做好细胞冻存,保证细胞质量1、吸去旧培养液。 2、PBS冲洗3次,每次2ml。 3、吸去PBS,胰酶1.5ml,放入孵育箱,消化4min后取出观察细胞悬浮情况。 4、3ml培液中止消化,轻轻吹打至底壁透光,制成细胞悬液。 5、吸入15ml离心管中,1000r/5min离心。 6、吸去上清,加入1ml冻存液(冻存液配制方法:DMSO和血清按1:9配制成10ml,离心管外面裹一层铝箔避光,放入4度冰箱保存),吹打均匀,吸入冻存管中。 7、放入梯度降温盒,-80℃冰箱过夜。 8、24h后从梯度盒取出冻存管,放入液氮罐保存(长期保存需放入液氮罐,短期3个月内冻存放入-80摄氏度即可)。 梯度盒 |