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石蜡染色荧光TUNEL是什么原因染色异常

石蜡切片荧光TUNEL实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min蒸馏水洗。

2、破膜:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止液体流走),在圈内滴加蛋白酶K工作液覆盖组织,37度温箱孵育15-30min。将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织,常温下孵育20min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

3、配制TUNEL:按片子数量和组织大小取Tunel试剂盒内适量试剂1 (TdT) 和试剂2(dUTP)按1:9混合,避光待用。

4、孵育:将配制好的TUNEL加到圈内覆盖组织,切片平放于湿盒内,37℃恒温箱孵育2小时,湿盒内加少量水保持湿度。

5、DAPI复染细胞核:切片用PBS(PH7.4)洗涤3次,每次5min。去除PBS后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min。

6、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

7、镜检拍照:切片于荧光显微镜下观察并采集图像。(DAPI紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm,发蓝光;FITC激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;CY3激发波长510-560,发射波长590nm,发红光。)

石蜡切片荧光TUNEL结果判读

  DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色,Roche试剂盒为FITC荧光素标记,阳性凋亡细胞核为绿色。

荧光TUNEL结果

荧光TUNEL结果




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