获得大量目的蛋白的最简单最经济的方法是利用原核表达系统表达外源基因。蛋白质一直是生物工程研究的一个重要方面,获得大量纯化的蛋白质是蛋白质理化性质与功能研究的基础。虽然20世纪90年代后有许多实验室利用哺乳动物细胞来表达外源蛋白,但迄今原核的大肠杆菌表达系统还是最常用的,因为大肠杆菌的遗传背景清楚,表达高效,经济方便。

实验流程

1、基因优化:靶基因序列设计,密码子优化并合成目的基因。

2、载体-宿主系统优化:根据蛋白特性构建表达载体,转化质粒到高效表达的大肠杆菌中。

3、表达条件优化:对重组的大肠杆菌进行摇瓶培养,并通过SDS-PAGE电泳检测对表达条件(时间、温度、IPTG浓度)进行严格控制和优化。

4、纯化蛋白:对表达的蛋白采用亲和,离子或凝胶过滤层析等方法进行纯化。首选上清,次选蛋白复性。对实验用SDS-PAGE和Western Blot验证目标蛋白纯度正确性,按照客户要求进行分装或冻干。

客户须知

1、无污染的质粒,最小量不得低于100ng

2、原始质粒图谱及序列文件

3、插入基因后质粒的商业测序报告

4、目标蛋白质相关信息

5、最终蛋白一般保存在常规的缓冲液中(Tris-HCl,PBS)

6、我们提供Western Blot的检测服务

交付标准

1、1-3mg蛋白

2、纯度>70%

3、表达菌株

4、实验报告

适用客户

本套餐特别适用于已经尝试过蛋白表达小试,结果为两种情况1、无表达或表达量偏低2、有表达但蛋白为包涵体。针对此类情况,我们的重点是优化表达条件,提高表达量,取得可溶性表达蛋白。

服务周期      2周