基因克隆与定点突变

基因克隆与定点突变技术服务

基因克隆(gene cloning)

基因克隆是70年代发展起来的一项具有革命性的研究技术,可概括为∶分、切、连、转、选。"分"是指分离制备合格的待操作的DNA,包括作为运载体的DNA和欲克隆的目的DNA;"切"是指用序列特异的限制性内切酶切开载体DNA,或者切出目的基因;"连"是指用DNA连接酶将目的DNA同载体DNA连接起来,形成重组的DNA分子;"转"是指通过特殊的方法将重组的DNA分子送入宿主细胞中进行复制和扩增;"选"则是从宿主群体中挑选出携带有重组DNA分子的个体。基因工程技术的两个最基本的特点是分子水平上的操作和细胞水平上的表达,而分子水平上的操作即是体外重组的过程,实际上是利用工具酶对DNA分子进行"外科手术"。一般来说,基因克隆技术包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接,构建成新的重组DNA,然后送入受体生物中去表达,从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。因此基因克隆技术又称为分子克隆、基因的无性繁殖、基因操作、重组DNA技术以及基因工程。

基因定点突变

基因突变是指由于DNA碱基对的置换、增添或缺失而引起的基因结构的变化,亦称点突变。在自然条件下发生的突变叫自发突变,由人工利用物理因素或化学药剂诱发的突变叫诱发突变。基因突变是生物变异的主要原因,是生物进化的主要因素。在生产上人工诱变是产生生物新品种的重要方法。根据基因结构的改变方式,基因突变可分为碱基置换突变和移码突变两种类型。

服务要求

1)请您通过EMAIL提供需要进行突变基因和克隆基因的全部详细序列;

突变前序列请标注为:wild sequence

突变后序列请标注为:mut sequence

2)请提供突变和克隆基因的详细背景资料;

如:突变前的测序结果,使用何种限制酶切位点,克隆于何种载体。

3)说明实验的具体要求。

4)签定必要的技术保密合同。

操作程序

1)我们将首先对测序结果进行分析,然后设计突变方案。

2)根据突变方案设计合成突变引物,进行基因突变实验的PCR反应,克隆变异体。

3) 进行DNA测序验证突变序列的正确性。