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Northern Blot原理 在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 用途 检测样品中是否含有基因的转录产物(mRNA)及其含量。 方法与步骤 1. 用具的准备: 2.用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染用RNAZap擦洗梳子,电泳槽,刀片等,然后用DEPC水冲洗二次,去除RNAZap。 3.制胶: 4. RNA样品的制备在RNA样品中加入3倍体积的formaldehyde load dye和适当的EB(终浓度为10ug/ml)。混匀后,65℃空气浴15min。短暂低速离心后,立即放置于冰上5min。 5. 电泳: 6. 转膜 7. 探针的制备 8. 探针的纯化及比活性测定: 9.预杂交: 10.探针变性: 11.杂交: 12.洗膜: 13.曝光: 14.去除膜上的探针:将200ml 0.1%SDS(由DEPC水配制)煮沸后,将膜放入,室温下让SDS冷却到室温,取出膜,去除多余的液体,干燥后,可以保存几个月。 15.杂交结果 注意事项 操作应该小心,但不必紧张。用于RNA电泳、转膜的所有器械、用具均须处理以除去RNAse 酶,以免样品的降解。转膜时,注意膜和多孔渗水屏之间不要有气泡。 服务周期 45个工作日 服务价格 电话详询 上一篇Southern Blot下一篇RACE |
