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酵母双(单)杂交cDNA文库构建1. 服务流程 1.1 客户样品QC 1.2 Total RNA的提取。 1.3 mRNA的分离。 1.4 以mRNA为模板进行cDNA双链的合成。 1.5 对合成的cDNA双链进行分级纯化。 1.6 将分级纯化的cDNA与pDONR222载体进行重组反应。 1.7 将重组产物转化DH10B感受态细胞。 1.8 cDNA文库的QC。 a) 检测文库库容量。 b)随机挑取32个克隆子,PCR检测平均插入片段大小,阳性率。 1.9 初级文库铺板,抽提质粒 1.10 初级文库质粒与PDEST22(或者pGADT7,pGADT7-Rec,pGADT7-Rec2, PCDNA3.1 或者其他任意指定 载体,根据客户需求确定载体)载体进行重组反应,电转化,检测文库质量。 a) 检测文库库容量。 b)每个文库随机挑取32个克隆子,PCR检测平均插入片段大小,阳性率。 2.送样要求 2.1 针对每个文库,客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本,或者至少500ug总RNA。 3.发货内容 3.1 我们提供构建好的酵母文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),扩增后初级文库甘油菌,初级 文库中抽质粒,随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告,酵母双杂交筛选相关细胞和质粒。 4.质量标准 4.1 文库库容量:大于1*10^7 CFU。 4.2 平均插入片段:大于1.2Kbp。 4.3 阳性率:大于95%。 5.服务时间 30个工作日内 收费:人民币30000元 |