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动物模型 | 慢性难愈合创面模型构建

慢性难愈合创面是指因多种外界或内在因素引起经治疗1个月以上愈合进展缓慢或仍未愈合的创面,主要包括创伤性溃疡、糖尿病溃疡、压疮、动静脉溃疡、癌性溃疡及感染性溃疡等。该疾病由于多种复杂的内外因素综合作用,致使创面存在持续的感染及慢性炎症而迁延难愈,所以在实验中动物模型应体现这一特点。

动物的选择

兔、狗、猪、鼠是较常用的模型动物。通常选用SD大鼠或 Wistar大鼠制作溃疡创面模型。中国地鼠经培育症状体征及体内生化水平都类似于II型糖尿病,可作为糖尿病疮疡动物模型的最佳选择。在性别方面,因雌性大鼠的生理周期特性及妊娠可能使实验受到干扰,一般选择雄性大鼠或雌雄各半。

造模方法

创伤性溃疡模型

常用皮肤切除+激素法。


造模方法


大鼠适应性喂养1周,麻醉后,在正中偏上的背部做一个直径2cm(可选择硬币或瓶盖) 标识,常规备皮并无菌消毒,切开标记处的全层皮肤至筋膜层,最后肌内注射一定量的醋酸氢化可的松。


优缺点


因其较易操作,所以实验常用此方法,但缺乏一个可靠的成功检测标准。感染是慢性创面的普遍特征,慢性创面中病原菌检测阳性率达81.03%,主要为大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌,然而在实验中普遍未应用病原菌的检测标准,因而很难推测模型创面是否与临床上难愈合创面一致。




糖尿病溃疡模型

采用链脲佐菌素(STZ)诱导致糖尿病模型+全层皮肤缺损法。先用链脲佐菌素(STZ)对胰岛素造成不同程度的破坏,使胰岛素分泌相对不足或绝对不足而建立糖尿病模型。


造模方法


SPF级Wistar大鼠高糖高脂饲料喂养1周后,禁食12h,腹腔注射STZ(60mg/kg),3d后每天测定大鼠的血糖,采用尾部静脉血测定,7d后若大鼠的非空腹血糖大于16.7mmol/L即可认为糖尿病模型制作成功;再制作创面:大鼠麻醉后,在正中偏上的背部两侧各做一个直径2cm的圆形标记,备皮及消毒,手术剪切开皮肤深达筋膜层,造成皮肤缺损创面;最后在造模区接种金黄色葡萄球菌。一般菌的数量是106/g组织。


注意事项


1、在此造模的过程中应该注意创面最好选择背部,面积约为2cm×2cm大小,以免过大超过大鼠耐受范围;血糖至少 16.7mmol/L以上,过低不符合糖尿病体征,过高易致大鼠死亡。

2、STZ具有对组织毒性小、动物存活率高等特点,广泛应用于构建糖尿病模型。

3、此模型能体现出临床糖尿病难愈合创面体征,但具体流程繁琐,操作较难,且整体造模成本高。



压疮模型

压疮即褥疮,常发生于老年、瘫痪致使长期卧床的患者中,骨隆突是疾病多发部位。其中缺血-再灌注压疮造模方法最符合临床发病机制及疾病特征。


造模方法


大鼠麻醉后,于后肢背侧备皮,将大鼠置于木板,呈仰卧位固定四肢,使压强为30kPa的磁铁或压力装置施压于双侧后肢膝关节小腿骨隆突处局部皮肤。该模型制作采用缺血-再灌注损伤原理,每个循环中,包括2h的缺血期和30min的再灌注期,3个循环/d,连续 2d。当受压部位出现红、肿、热等炎症反应,继发有红斑、水泡、溃疡时可认为造模成功。


优点


此方法符合临床压疮发生实际情况,可操作性强,成本不高。


用途


此模型用于动物压疮实验参考。



感染性溃疡


感染是造成创面迁延难愈的重要因素,常用皮损法+涂菌法。


造模方法


大鼠麻醉后,在大鼠的背部脊椎两侧各做一个直径2cm的圆形标记,切开全层皮肤并深达筋膜层,创面充分止血后种植一定浓度的大肠杆菌或金黄色葡萄球菌,3d后创面附有脓性分泌物,渗液较多,皮缘红肿,皮温升高,即可认为造模成功。


优点


制作方法简单,成本低,成功率较高。


用途


应用于感染性创面的实验研究。

结论

慢性创面基础实验研究中,因不同慢性疾病导致的创面不同,造模方法各异,标准难统一。由于人与动物的皮肤结构和生理特性存在显著差异,难以复制出完全与人类创面一致的动物模型,需要研究者们继续摸索。


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