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Western blot | 条带问题千千万,旧的不去新的又来

蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现己广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。


蛋白实验虽然简单,但是条带容易出现的问题极多,下面来分享一下不同条带的原因和解决办法吧。

蛋白实验(3).jpg


出现不均匀的白色斑点的原因


  1. 转膜时有气泡

  2. 膜上抗体分布不均匀

解决办法

  1. 转膜前小心去除气泡

  2. 抗体孵育时保持摇动


条带的“微笑”效应的原因

  1. 迁移过快

  2. 电泳时温度过高

解决办法

  1. 优化电泳条件

  2. 降低电泳温度,在冰上操作


条带分布不均匀的原因

  1. 可能和抗体有关

  2. 可能孵育时振荡不均匀

  3. 抗体和封闭液不结合

解决办法

  1. 更换二抗

  2. 确保孵育过程中膜完全浸没在抗体中,孵育时确保摇晃均匀

  3. 尝试更换封闭液


条带问题千千万,以上内容只涉及小部分原因和解决办法,还有很多其他因素。总之,有时候步骤正确可能是操作手法的问题,建议大家做实验的时候严谨一点哦。

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