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western blot蛋白凝胶电泳在一个固定的点缓慢地加入胶,在胶凝固之前不要移动位置。加交叉梳子不要有气泡,然后加入蛋白样品,盖上盖子检查正负极,恒压100v大约跑90分钟,提前用1*Buffer浸泡NC膜,胶泡好后,小心的撬开玻璃板,把多余的胶切掉,三明治的顺序是黑色一面-海绵-滤纸-胶-NC膜-滤纸-海绵-白色一面,插入清洗过的电泳槽,倒入1*Buffer,倒入百分之五脱脂奶粉封闭一小时,(一抗孵育),将膜放入自封袋中,加入抗体,4度过夜,室温摇床用1*TBST洗膜三次,(二抗孵育)百分之三的脱脂奶粉,将显色剂均匀滴加于膜上,反应五秒,放入暗盒中,盖上暗盒曝光3-5秒,红灯下观察至条带出现。 |