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石蜡切片HE染色实验步骤

1.组织包埋

(1)乙醇脱水:组织经不同浓度的乙醇溶液进行逐级脱水 70% 80% 90% 95% 100% 100%,各级乙醇 40min(注意:骨性及钙化组织需在JYBL-Ⅱ脱钙液中浸泡24h,待组织软化后再进行乙醇脱水步骤);

(2)透明:组织依次浸泡于三个二甲苯中,每缸各1h;

(3)浸蜡:组织依次浸泡于三个石蜡缸中,每缸各1h;

(4)包埋:将液态的石蜡倒入模具盒中,再将浸好蜡的组织块平放底部,注意切面方向朝下放置,待石蜡凝固后去掉包埋框,完全冷却变硬后再修整蜡块,组织外围的石蜡保留适中以便切片。

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2.切片制作

将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上,使蜡块的切面与刀口成平行方向,刀的倾斜度通常15℃,转动轮转推进器,调节切片厚度为 4μm,切成厚度均匀的切片。左手持毛笔,右手旋动切片机转把,切片带出来之后,用毛笔轻轻托起,再用镊子轻镊蜡片,以正面放入展片箱中,其水温 45℃左右。待摊平整后捞片。贴附切片左手持载玻片之一端,垂直入水去附贴切片,右手用镊子辅助推动,附贴至玻片上的三分之二处。切片贴附后,放在空气中稍晾干,放置 65℃烤片机上烤1h,再放置烘箱内烘烤2h。

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3.石蜡切片脱蜡至水

依次将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脱蜡。

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4.HE染色

石蜡切片入苏木素染0.5-1分钟min,自来水漂洗,1%盐酸酒精分化数秒,自来水漂洗,然后1%氨水水溶液返蓝1min,流水冲洗数秒,放入伊红染液中染色数秒,流水漂洗。

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5.脱水封片

石蜡切片依次放入75%乙醇 2min -85%乙醇 2min-无水乙醇5min -无水乙醇5min -二甲苯5min 透明,将切片从二甲苯拿出来中性树胶封片。

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6.结果判读

细胞核为蓝色,细胞质为红色

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