脓毒血症是机体神经、免疫、内分泌、凝血等系统功能严重受损后,其中各种有害性刺激(主要是外源性微生物)可激活机体免疫细胞,导致大量促炎细胞因子,生成和释放,进而引起炎症的瀑布样级联反应,在全身炎性反应的进行性加重方面起关键作用。

目前在脓毒血症的研究已达分子水平,临床上治疗手段也日趋完善,但脓毒血症、脓毒血症休克、多器官功能不全乃至最终多器官功能衰竭,仍是外科危重患者死亡的主要原因。

本文介绍一种简单的盲肠结扎穿刺法(cecum ligation and puncture,CLP )构建脓毒血症模型,为临床研究奠定模型基础。

• 选取体重为21～25g的小鼠(BALB/c或者C57均可,也可用体重为220g左右的SD大鼠),雌雄不限。

• 动物适应性饲养3-5天,实验前禁食12h。

• 按60uL/10g体重的剂量经腹腔注5%的水合氯醛麻醉后,将动物仰卧固定于手术板上,腹部手术区常规消毒与去毛,无菌条件下用手术刀在腹壁作一长约2cm切口,经切口进腹在回盲瓣远端分离并以3号丝线结扎1/3处盲肠。

• 用18号注射针头于结扎端穿孔,并挤出粪便少许,尽量避免损伤血管,然后用4号丝线间断缝合腹膜及皮肤,同时立即皮下注射生理盐水50ml/kg体重抗休克。

  
  

造模后小鼠逐渐出现竖毛、腹泻、脓尿,模型动物表现出饮水、进食及活动次数减少,动物常于术后12h全身炎性反应达峰值,小鼠活动次数明显减少,且活动失去昼夜规律。应用动物进行盲肠结扎穿孔是复制临床脓毒症模型,尤其是胃肠穿孔的最佳动物模型,它能很好地反映出脓毒血症发展过程中免疫学及血流动力学的双向变化。

注意事项:

1 实验动物选择的体重要适当,不能过大也不能过小

2手术环境及手术器械要严格注意消毒

3手术完成后要及时对动物进行保温和补液,以减少死亡率

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