细胞周期是指以有丝分裂方式增殖的细胞从亲代分裂结束到子细胞分裂结束所经历的过程。通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G1期:细胞开始RNA和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体。S期:DNA开始合成,这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。当DNA复制结束成为4倍体时,细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质,直到进入M期。因此,单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,这两个细胞或者进入下一个细胞周期,或者进入静止期(G0期),而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此,整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%、S%、G2/M%,了解增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。

细胞周期检测的原理:

核酸染料可以与DNA分子特异性的结合,细胞周期检测中PI最为常用。PI为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周

1 首先在我们的电脑上安装FlowJo X

2 打开上图的第二个图标,直接拖入需要分析的流式周期fcs文件

3 双击打开要分析的文件,会出现以下界面。X轴选择FSC-A,Y轴选择SSC-A。请注意标红框的位置要选择Linear Axis。

4 在文件左上区域根据习惯选择一种圈门方式,圈出符合分析条件的细胞团

5 双击细胞团,进入一个新的界面。用方框的门圈出single cells。

6 返回主界面,右键single cells,选择cell cycle。

7 出现如下界面,单击OK。

8  进入结果分析界面,选择通道PE-A

9 然后就得到了彩色的周期图。

10 返回主界面,选择如下图标,将cell cycle直接拖入右边对话框,再储存成我们需要的文件格式。

11 如果需要批量分析的话,可以选中如下文件,直接鼠标拖入下一个文件中。导出文件时,也可以批量导出。

由于不同实验做出的周期文件都是有些差异的,不同版本的软件也会有小的不同,如果您再实验或分析的过程中遇到了什么问题,欢迎随时联系我们!