•背景技术:

白血病是一种造血系统恶性增殖性疾病,通常指因白血病细胞大量增殖、累积所引起的一类疾病。由于白血病分型和预后分层的复杂性,所以为了获得更好的治疗效力,对白血病的研究势在必行。然而,体外培养的白血病细胞的生物学特征与体内的白血病细胞生物学特征通常存在一定的差异,且在人体上进行实验会导致极高的成本和风险,所以,其对应的动物模型是对白血病深入研究的重要环节。

小鼠是白血病研究中常用的理想动物模型,人类血液系统的髓系、淋巴系等恶性肿瘤均可获得相应的小鼠模型,但是现有的人源化小鼠模型依然存在构建成功率低、临床相关性不高等缺陷。

•技术实现要素:

本技术提供了白血病疾病模型、其构建方法以及通过该模型对候选药物效力进行评估的方法和系统。疾病模型构建方法直接建立患者来源的移植瘤疾病模型,具有很高的成功率,此方法建立的疾病模型具有很高的临床相关性。

制备白血病人源化疾病模型的方法:

a)将来自白血病患者的骨髓样本制备为细胞悬液,并使用单核细胞分离液来对所述细胞悬液进行离心分离;

b)获取包含白血病细胞的细胞层并制备白血病细胞悬液;

c)判断所述白血病是否为T细胞型白血病;

对于非T细胞型白血病,去除由b)获得的所述白血病细胞悬液中的T细胞,得到待接种的白血病细胞悬液,并使所述待接种的白血病细胞悬液中白血病细胞的终密度为2x107/ml至5x107/ml;

对于T细胞型白血病,从由b)获得的所述白血病细胞悬液制备待接种的白血病细胞悬液,其中白血病细胞的终密度为2x107/ml至5x107/ml;

d)根据所述患者的白血病类型选择适当的免疫缺陷型小鼠,并对所述免疫缺陷型小鼠进行放射性处理;

e)将由c)获得的所述待接种的白血病细胞悬液注射接种到d)所述经放射性处理的免疫缺陷型小鼠中。

在某些实施方式中,所述患者骨髓样本中白血病细胞的含量为至少90%。

在某些实施方式中,所述单核细胞分离液为Ficoll,且所述离心分离为密度梯度离心分离。

在某些实施方式中,使用RPMI细胞培养基制备白血病细胞悬液。

在某些实施方式中,被去除的所述T细胞为CD3阳性T细胞。例如,可通过使用包含CD3抗体的磁珠来去除所述CD3阳性T细胞。

在某些实施方式中,可使用高磁场来去除所述CD3阳性T细胞。

在某些实施方式中,所述白血病类型为急性淋巴细胞性白血病,且所述免疫缺陷型小鼠为NSG小鼠。对于该NSG小鼠,所述放射性处理为X射线辐射,且辐射剂量为200cGy至300cGy。

在某些实施方式中,所述白血病类型为急性髓性白血病,且所述免疫缺陷型小鼠为MISTRG小鼠。对于该MISTRG小鼠,所述放射性处理为X射线辐射,且辐射剂量为550cGy至650cGy。

在某些实施方式中,在注射所述白血病细胞悬液之前的12-24小时内对所述免疫缺陷型小鼠进行所述放射性处理。

在某些实施方式中,所述免疫缺陷型小鼠的年龄为5-7周。

在某些实施方式中,在注射接种所述基本不含T细胞的白血病细胞悬液之前对所述免疫缺陷型小鼠进行红外灯照射及加热。

在某些实施方式中,所述方法还包括监测来自所述患者的白血病细胞在所述小鼠体内的生长情况。例如,可通过监测经注射接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例来监测来自所述患者的白血病细胞在所述小鼠体内的生长情况。

在某些实施方式中,所述方法进一步包括:

g)当经注射接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例至少为50%时,分离所述小鼠的脾脏,使其破碎,并使经破碎的所述脾脏的细胞悬浮于细胞培养基中,以获得来自所述脾脏的细胞悬液;

h)使用单核细胞分离液来对所述来自脾脏的细胞悬液进行离心分离;

i)获取包含白血病细胞的细胞层,使该细胞层中的细胞悬浮于含有10%DMSO的胎牛血清中,以制备细胞终密度为2x107/ml至5x107/ml的储备液;以及

j)将由i)获得的所述储备液冷冻储存在液氮中备用。

另一方面,涉及一种白血病人源化疾病模型,所述的用于制备白血病人源化疾病模型的方法制备。

在一个方面,涉及一种白血病药物筛选方法,该方法包括:

a)获取本申请所述的白血病人源化疾病模型;

b)监测所述白血病人源化疾病模型的外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例,当该比例达到1%-5%时,向所述模型施用候选药物;

c)施用所述候选药物后,继续监测所述huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞在所述模型外周血细胞中所占比例的变化,以评估该候选药物的效力。

在某些实施方式中,施用所述候选药物后,当所述huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞在所述模型外周血细胞中所占比例保持低于1%,并维持该比例至少2周时,判定所述候选药物有效。

在某些实施方式中,所述候选药物选自下组中的一种或多种:长春新碱、氨甲叶酸、地塞米松、阿霉素、左旋门冬酰胺、拓扑替康、氯法拉滨、卡非佐米、替西罗莫司、达沙替尼、硼替佐米、SAR3419、全反式维甲酸、SAHA、舒尼替尼、环磷酰胺和维甲酰酚胺。

例如,所述候选药物可包括长春新碱,且以如下方式向所述模型施用所述长春新碱:通过腹腔注射施用,每次施用量为0.5mg/kg,每周施用一次且持续施用3-6周。

例如,所述候选药物可包括氨甲叶酸,且以如下方式向所述模型施用所述氨甲叶酸:通过腹腔注射施用,每次施用量为3-6mg/kg,每日施用一次,隔周施用且持续施用6-10周。

例如,所述候选药物可包括地塞米松,且以如下方式向所述模型施用所述地塞米松:通过腹腔注射施用,每次施用量为10-20mg/kg,每日施用一次且持续施用3-6周。

例如,所述候选药物可包括阿霉素,且以如下方式向所述模型施用所述阿霉素:通过静脉注射施用,每次施用量为0.5-3mg/kg,每周施用一次且持续施用3-6周。

例如,所述候选药物可包括左旋门冬酰胺,且以如下方式向所述模型施用所述左旋门冬酰胺:通过腹腔注射施用,每次施用量为500-2000KU/kg,每日施用一次且持续施用3-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括拓扑替康,且以如下方式向所述模型施用所述拓扑替康:通过腹腔注射施用,每次施用量为0.1-5mg/kg,每日施用一次且持续施用2-8周,给药两周后停药一周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括氯法拉滨,且以如下方式向所述模型施用所述氯法拉滨:通过腹腔注射施用,每次施用量为10-100mg/kg,每日施用一次且持续施用3-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括卡非佐米,且以如下方式向所述模型施用所述卡非佐米:通过静脉注射施用,每次施用量为0.1-10mg/kg,每周施用二次且持续施用3-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括替西罗莫司,且以如下方式向所述模型施用所述替西罗莫司:通过腹腔注射施用,每次施用量为5-50mg/kg,每日施用一次且持续施用1-3周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括达沙替尼,且以如下方式向所述模型施用所述达沙替尼:通过口服施用,每次施用量为5-50mg/kg,每日施用一次且持续施用2-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括硼替佐米,且以如下方式向所述模型施用所述硼替佐米:通过腹腔注射施用,每次施用量为0.1-20mg/kg,每周施用二次且持续施用4-8周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括SAR3419,且以如下方式向所述模型施用所述SAR3419:通过腹腔注射施用,每次施用量为0.5-50mg/kg,每周施用一次且持续施用4-8周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括全反式维甲酸,且以如下方式向所述模型施用所述全反式维甲酸:通过腹腔注射施用,每次施用量为0.5-10mg/kg,每周施用一次且持续施用2-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括SAHA,且以如下方式向所述模型施用所述SAHA:通过腹腔注射施用,每次施用量为100-500mg/kg,每日施用一次且持续施用3-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括舒尼替尼,且以如下方式向所述模型施用所述舒尼替尼:通过口服施用,每次施用量为10-100mg/kg,每日施用一次且持续施用2-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括环磷酰胺,且以如下方式向所述模型施用所述环磷酰胺:通过腹腔注射施用,每次施用量为30-300mg/kg,每日施用一次且持续施用2-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括维甲酰酚胺,且以如下方式向所述模型施用所述维甲酰酚胺:通过腹腔注射施用,每次施用量为20-200mg/kg,每日施用一次且持续施用2-6周。

在一个方面,本申请涉及一种白血病药物筛选系统,该系统包括本申请所述的白血病人源化疾病模型。

在某些实施方式中,该系统还包括一种或多种候选药物。所述候选药物可选自下组中的一种或多种:长春新碱、氨甲叶酸、地塞米松、阿霉素、左旋门冬酰胺、拓扑替康、氯法拉滨、卡非佐米、替西罗莫司、达沙替尼、硼替佐米、SAR3419、全反式维甲酸、SAHA、舒尼替尼、环磷酰胺和维甲酰酚胺。

例如,所述候选药物可包括长春新碱,且所述长春新碱适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为0.5mg/kg,每周施用一次且持续施用3-6周。

例如,所述候选药物可包括氨甲叶酸,且所述氨甲叶酸适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为3-6mg/kg,每日施用一次,隔周施用且持续施用6-10周。

例如,所述候选药物可包括地塞米松,且所述地塞米松适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为10-20mg/kg,每日施用一次且持续施用3-6周。

例如,所述候选药物可包括阿霉素,且所述阿霉素适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过静脉注射施用,每次施用量为0.5-3mg/kg,每周施用一次且持续施用3-6周。

例如,所述候选药物可包括左旋门冬酰胺,且所述左旋门冬酰胺适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为500-2000KU/kg,每日施用一次且持续施用3-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括拓扑替康,且所述拓扑替康适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为0.1-5mg/kg,每日施用一次且持续施用2-8周,给药两周后停药一周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括氯法拉滨,且所述氯法拉滨适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为10-100mg/kg,每日施用一次且持续施用3-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括卡非佐米,且所述卡非佐米适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过静脉注射施用,每次施用量为0.1-10mg/kg,每周施用二次且持续施用3-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括替西罗莫司,且所述替西罗莫司适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为5-50mg/kg,每日施用一次且持续施用1-3周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括达沙替尼,且所述达沙替尼适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过口服施用,每次施用量为5-50mg/kg,每日施用一次且持续施用2-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括硼替佐米,且所述硼替佐米适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为0.1-20mg/kg,每周施用二次且持续施用4-8周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括SAR3419,且所述SAR3419适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为0.5-50mg/kg,每周施用一次且持续施用4-8周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括全反式维甲酸,且所述全反式维甲酸适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为0.5-10mg/kg,每周施用一次且持续施用2-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括SAHA,且所述SAHA适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为100-500mg/kg,每日施用一次且持续施用3-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括舒尼替尼,且所述舒尼替尼适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过口服施用,每次施用量为10-100mg/kg,每日施用一次且持续施用2-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括环磷酰胺,且所述环磷酰胺适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为30-300mg/kg,每日施用一次且持续施用2-6周。

在某些实施方式中,所述候选药物包括维甲酰酚胺,且所述维甲酰酚胺适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型:适于通过腹腔注射施用,每次施用量为20-200mg/kg,每日施用一次且持续施用2-6周。