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首页 >> 科研产品 >>免疫学 >>ELISA Kit >> 小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
详细说明

小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

价格
¥2600 96T
城市
全国
供货数量
10000
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产品编号 MD7125
  • 商品说明
  • 商品参数

检测范围

15.6-1000pg/mL.标准曲线的浓度为 1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.3pg/ml,15.6pg/ml。

[试剂准备]

1、 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25℃),如果该试剂盒在一段时间内

不能使用,请仅取出本次试验所需的酶标条和试剂,并将剩余的酶标条及试剂按指定条件保存。

 

2、 标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液 1mL,盖好后室温静置大约 10 分钟,同时轻轻摇动(避免起泡)。先将其稀释为 1000pg/mL (标准曲线最高浓度)后,再准备 5 个稀释标准品的 EP 管,依次稀释成 1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.3pg/ml,15.6pg/ml,标准品稀释液(0 ng/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

 

3、检测溶液 A 及检测溶液 B:Detection A 及 Detection B 在使用前请用手甩几下或短暂离心处理,以使黏附在管壁或瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液 A或 B 1:100 稀释,充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μL/孔),实际配制时应多配制 0.1-0.2mL。

4、 浓洗涤液:580mL 蒸馏水或去离子水加入 20mL 洗涤液(30×)稀释至 600mL 至工

作液浓度。

5、 底物溶液:请用灭菌的移液器和吸头吸取所需体积的 TMB 至另一干净容器中使用,

容器中剩余的底物应予丢弃,不要倒回 TMB 瓶中。

4、 请勿重复使用已经稀释过的标准品、检测溶液 A 工作液和检测溶液 B 工作液。

5、 洗涤液(30x)中如有结晶析出,请先温育至室温,轻轻混匀,至到结晶完全溶解再进

行配制。

6、 试剂盒中部分试剂为储存液,客户需配置成工作液后使用,请使用双蒸水配置。

 

[操作步骤]

1、 加样:分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。设标准孔 7 孔,依次加入 100μL 不同浓度的标准品(见试剂准备 2)。空白孔加 100μL 标准品稀释液(见试剂准备第二

步最后一管),余孔加待测样品 100μL,酶标板加上覆膜,37℃ 温育 1 小时。

2、 弃去液体,甩干,不用洗涤。

3、 每孔加检测溶液 A 工作液 100μL(临用前配制),酶标板覆膜,37℃ 温育 1 小时。

4、 弃去孔内液体,每孔用 350μL 的洗涤液洗涤,浸泡 1-2 分钟,在吸水纸上轻拍酶标

板来移除孔内所有液体。重复洗板 3 次。最后一次洗涤后,吸取或倒出剩余的洗涤缓

冲液,将酶标板倒扣在吸水纸上,将残留在孔内的液体全部吸干。此过程也可采用喷

射瓶,多道移液器 或自动洗板机来完成。

5、 每孔加检测溶液 B 工作液(临用前配制)100μL,酶标板覆膜,37℃ 温育 30 分钟。

6、 弃去孔内液体,甩干,洗板 5 次,方法同步骤 4。

7、 每孔加 TMB 底物溶液 90μL,酶标板覆膜,37℃ 避光显色(反应时间控制在 10-20

分钟,不要超过 30 分钟。当标准孔的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色,后 3-4 孔梯度

不明显时,即可终止)。

8、 每孔加终止溶液 50μL,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与

底物溶液的加入顺序相同。如出现颜色不匀一,请轻轻晃动酶标板以使溶液混合均匀。

9、 在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后,立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光

密度值(OD 值)。

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