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小鼠白介素 6(IL-6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
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产品编号 MD123475
检测范围 15.6-1000pg/mL.标准曲线的浓度为 1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.3pg/ml,15.6pg/ml。
[标本的采集与保存] 1、 血清:将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃ 过夜,然后 1,000×g 离心 20 分钟,取上清即可,将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,避免反复冻融。 2、血浆:用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8℃ 1,000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,避免反 复冻融。 3、其它生物标本:请 1,000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,避免反复冻融。
[试剂准备] 1、 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25℃),如果该试剂盒在一段时间内 不能使用,请仅取出本次试验所需的酶标条和试剂,并将剩余的酶标条及试剂按指定 条件保存。 2、 标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液 1mL,盖好后室温静置大约 10 分 钟,同时轻轻摇动(避免起泡)。先将其稀释为 1000pg/mL (标准曲线最高浓度)后,再准 备 5 个稀释标准品的 EP 管,依次稀释成 1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml, 62.5pg/ml,31.3pg/ml,15.6pg/ml,标准品稀释液(0 ng/mL)直接作为空白孔。为保证实验结 果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 3、检测溶液 A 及检测溶液 B:Detection A 及 Detection B 在使用前请用手甩几下或短 暂离心处理,以使黏附在管壁或瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液 A 或 B 1:100 稀释(如:10μL 检测溶液 A/990μ L 检测稀释液 A),充分混匀,稀释前 根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μL/孔),实际配制时应多配制 0.1-0.2mL。 4、 浓洗涤液:580mL 蒸馏水或去离子水加入 20mL 洗涤液(30×)稀释至 600mL 至工 作液浓度。 5、 底物溶液:请用灭菌的移液器和吸头吸取所需体积的 TMB 至另一干净容器中使用, 容器中剩余的底物应予丢弃,不要倒回 TMB 瓶中。 [操作步骤] 1、 加样:分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。设标准孔 7 孔,依次加入 100μL 不同 浓度的标准品(见试剂准备 2)。空白孔加 100μL 标准品稀释液(见试剂准备第二 步最后一管),余孔加待测样品 100μL,酶标板加上覆膜,37℃ 温育 1 小时。 2、 弃去液体,甩干,不用洗涤。 3、 每孔加检测溶液 A 工作液 100μL(临用前配制),酶标板覆膜,37℃ 温育 1 小时。 4、 弃去孔内液体,每孔用 350μL 的洗涤液洗涤,浸泡 1-2 分钟,在吸水纸上轻拍酶标 板来移除孔内所有液体。重复洗板 3 次。最后一次洗涤后,吸取或倒出剩余的洗涤缓 冲液,将酶标板倒扣在吸水纸上,将残留在孔内的液体全部吸干。此过程也可采用喷 射瓶,多道移液器 或自动洗板机来完成。 5、 每孔加检测溶液 B 工作液(临用前配制)100μL,酶标板覆膜,37℃ 温育 30 分钟。 6、 弃去孔内液体,甩干,洗板 5 次,方法同步骤 4。 7、 每孔加 TMB 底物溶液 90μL,酶标板覆膜,37℃ 避光显色(反应时间控制在 10-20 分钟,不要超过 30 分钟。当标准孔的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色,后 3-4 孔梯度 不明显时,即可终止)。 8、 每孔加终止溶液 50μL,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与 底物溶液的加入顺序相同。如出现颜色不匀一,请轻轻晃动酶标板以使溶液混合均匀。 9、 在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后,立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光 密度值(OD 值)。 |