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小鼠白介素 1β(IL-1β)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)白介素 1β(IL-1β)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 1、450±10nm 滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热) 2、单道或多道微量移液器及吸头 3、稀释样品的 EP 管 4、蒸馏水或去离子水 5、吸水纸 6、盛放洗液的容器 [试剂盒的储存及有效期] 1、 未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将 标准品、检测溶液 A、检测溶液 B 以及 96 孔板保存于-20℃,其余试剂请置于 4℃ 保 存备用。 2、 使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,此外,请将未使用酶标 条用包含干燥剂的铝箔袋装好,并拉紧密封铝箔袋,置于-20℃ 保存。 注意:试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实 验后 1 个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保 是稳定的。[标本的采集与保存] 1、 血清:将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃ 过夜,然后 1,000×g 离心 20 分钟,取上清即可,将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,避免反复冻融。 2、血浆:用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8℃ 1,000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,避免反 复冻融。 3、其它生物标本:请 1,000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,避免反复冻融。 注意: 1、 以上标本均需密封保存,4℃ 保存小于 1 周,-20℃ 不超过 1 个月,-80℃ 不超过 2 个月。 2、 标本出现溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。 3、 标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。 [试剂准备] 1、 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温( 18-25℃),如果该试剂盒在一段时间内 不能使用,请仅取出本次试验所需的酶标条和试剂,并将剩余的酶标条及试剂按指定 条件保存。 2、 标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液 1mL,盖好后室温静置大约 10 分 钟,同时轻轻摇动(避免起泡)。先将其稀释为 800pg/mL (标准曲线最高浓度)后, 再准备 5 个稀释标准品的 EP 管,依次稀释成 800pg/ml,400pg/ml,200pg/ml, 100pg/ml,50pg/ml,25pg/ml,12.5pg/ml,标准品稀释液(0 ng/mL)直接作为空白孔。 为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 3、检测溶液 A 及检测溶液 B:Detection A 及 Detection B 在使用前请用手甩几下或短 暂离心处理,以使黏附在管壁或瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液 A 或 B 1:100 稀释(如:10μL 检测溶液 A/990μ L 检测稀释液 A),充分混匀,稀释前 根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μL/孔),实际配制时应多配制 0.1-0.2mL。 4、 浓洗涤液:580mL 蒸馏水或去离子水加入 20mL 洗涤液( 30×)稀释至 600mL 至工 作液浓度。 5、 底物溶液:请用灭菌的移液器和吸头吸取所需体积的 TMB 至另一干净容器中使用, 容器中剩余的底物应予丢弃,不要倒回 TMB 瓶中。注意: 1、 标准品的稀释不能直接在板中进行。 2、 标准品请于临用前 15 分钟内配制。该标准品只能使用一次。 3、 标准品、检测溶液 A 工作液、检测溶液 B 工作液请使用相应的稀释液配制,稀释液 不能混用。用移液枪轻轻吹打充分混匀,避免起泡。为保证实验结果的准确性请使用 微量吸管,并校准微量移液器。请依据所需的量精确配制,尽量不要使用微量配制的 方法(如吸取检测溶液 A 时,一次不要小于 10μL),以避免造成浓度误差。 4、 请勿重复使用已经稀释过的标准品、检测溶液 A 工作液和检测溶液 B 工作液。 5、 洗涤液( 30x)中如有结晶析出,请先温育至室温,轻轻混匀,至到结晶完全溶解再进 行配制。 6、 试剂盒中部分试剂为储存液,客户需配置成工作液后使用,在配置过程中可能因为纯 净水质量差或水质污染,以及实验中所用耗材洁净度差,造成实验结果不准确,甚至 完全错误。请使用双蒸水配置。 [标本处理] 1、本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使 用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。 2、 实验前应先预测样本中待测物浓度。当浓度不在标准曲线的范围内时,用户必须确定 其特定实验的最佳样品稀释倍数。如果样品中待测物浓度过高或过低,请对样本做适 当的稀释或浓缩。样本稀释需 PBS。 3、 若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其有效性,并注意留 存样本。 4、 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致 ELISA 实验结果偏差。 5、 若样本为细胞培养上清,因为该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采 样时间等,所以可能存在检测不出的情况。 6、 某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与本产品所使用的检 测抗体及捕获抗体不匹配,而不被检测出。 7、 建议使用新鲜样本,保存时间过长可能会因蛋白降解或变性而导致实验结果偏差。 [操作步骤] 1、 加样:分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。设标准孔 7 孔,依次加入 100μL 不同浓度的标准品(见试剂准备 2)。空白孔加 100μL 标准品稀释液(见试剂准备第二 步最后一管),余孔加待测样品 100μL,酶标板加上覆膜,37℃ 温育 1 小时。 2、 弃去液体,甩干,不用洗涤。 3、 每孔加检测溶液 A 工作液 100μL(临用前配制),酶标板覆膜,37℃ 温育 1 小时。 4、 弃去孔内液体,每孔用 350μL 的洗涤液洗涤,浸泡 1-2 分钟,在吸水纸上轻拍酶标 板来移除孔内所有液体。重复洗板 3 次。最后一次洗涤后,吸取或倒出剩余的洗涤缓 冲液,将酶标板倒扣在吸水纸上,将残留在孔内的液体全部吸干。此过程也可采用喷 射瓶,多道移液器 或自动洗板机来完成。 5、 每孔加检测溶液 B 工作液(临用前配制)100μL,酶标板覆膜,37℃ 温育 30 分钟。 6、 弃去孔内液体,甩干,洗板 5 次,方法同步骤 4。 7、 每孔加 TMB 底物溶液 90μL,酶标板覆膜,37℃ 避光显色(反应时间控制在 10-20 分钟,不要超过 30 分钟。当标准孔的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色,后 3-4 孔梯度 不明显时,即可终止)。 8、 每孔加终止溶液 50μL,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与 底物溶液的加入顺序相同。如出现颜色不匀一,请轻轻晃动酶标板以使溶液混合均匀。 9、 在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后,立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光 密度值(OD 值)。 注意: 1、 试剂准备:准备一次实验所需要的酶标条,其它的可从微孔板上拆下,密封,按照说 明书要求保存,以备下次使用。 2、 加样:实验操作中请使用一次性的灭菌吸头,避免污染。加样时注意不要有气泡产生, 将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。与反应试剂加入一样,加 样过程中第一个孔与最后一个孔加样时间间隔尽量小(一般控制在 10 分钟以内), 如果太大,将会导致不同的“预温育”时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复 性。为了测值的准确性,推荐设置复孔进行实验。 3、 温育:为防止样品蒸发,实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内,以避免液体 蒸发,洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态,同时应 严格遵守给定的温育时间和温度。 4、 洗涤:充分洗涤非常重要,在每次洗涤过程中,都要将洗涤液完全甩干。洗涤过程中 反应孔内残留的洗涤液应在吸水纸上拍干,勿将吸水纸直接放入反应孔中吸水,同时 要轻轻擦除板底残留的液体和手指印,避免影响最后的酶标仪读数。如果使用自动洗板机,请在熟练使用后再用于正式实验过程中。 5、 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔 10 分钟观 察一次),如观察到颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强而影响酶 标仪光密度读数。 6、 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。 7、 如果实验室内湿度低于 60%,推荐使用加湿器提高湿度水平。
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产品编号 MD6758
检测范围 12.5-800pg/mL.标准曲线的浓度为 800pg/ml,400pg/ml,200pg/ml,100pg/ml, 50pg/ml,25pg/ml,12.5pg/ml。
[标本的采集与保存] 1、 血清:将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃ 过夜,然后 1,000×g 离心 20 分钟,取上清即可,将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,避免反复冻融。 2、血浆:用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8℃ 1,000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,避免反 复冻融。 3、其它生物标本:请 1,000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存,避免反复冻融。
[试剂准备] 1、 使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25℃),如果该试剂盒在一段时间内 不能使用,请仅取出本次试验所需的酶标条和试剂,并将剩余的酶标条及试剂按指定 条件保存。 2、 标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液 1mL,盖好后室温静置大约 10 分 钟,同时轻轻摇动(避免起泡)。先将其稀释为 800pg/mL (标准曲线最高浓度)后, 再准备 5 个稀释标准品的 EP 管,依次稀释成 800pg/ml,400pg/ml,200pg/ml, 100pg/ml,50pg/ml,25pg/ml,12.5pg/ml,标准品稀释液(0 ng/mL)直接作为空白孔。 为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 3、检测溶液 A 及检测溶液 B:Detection A 及 Detection B 在使用前请用手甩几下或短暂离心处理,以使黏附在管壁或瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液 A或 B 1:100 稀释(如:10μL 检测溶液 A/990μ L 检测稀释液 A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μL/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2mL。 4、 浓洗涤液:580mL 蒸馏水或去离子水加入 20mL 洗涤液(30×)稀释至 600mL 至工作液浓度。 5、 底物溶液:请用灭菌的移液器和吸头吸取所需体积的 TMB 至另一干净容器中使用, 容器中剩余的底物应予丢弃,不要倒回 TMB 瓶中。 [操作步骤] 1、 加样:分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。设标准孔 7 孔,依次加入 100μL 不同浓度的标准品(见试剂准备 2)。空白孔加 100μL 标准品稀释液(见试剂准备第二 步最后一管),余孔加待测样品 100μL,酶标板加上覆膜,37℃ 温育 1 小时。 2、 弃去液体,甩干,不用洗涤。 3、 每孔加检测溶液 A 工作液 100μL(临用前配制),酶标板覆膜,37℃ 温育 1 小时。 4、 弃去孔内液体,每孔用 350μL 的洗涤液洗涤,浸泡 1-2 分钟,在吸水纸上轻拍酶标 板来移除孔内所有液体。重复洗板 3 次。最后一次洗涤后,吸取或倒出剩余的洗涤缓 冲液,将酶标板倒扣在吸水纸上,将残留在孔内的液体全部吸干。此过程也可采用喷 射瓶,多道移液器 或自动洗板机来完成。 5、 每孔加检测溶液 B 工作液(临用前配制)100μL,酶标板覆膜,37℃ 温育 30 分钟。 6、 弃去孔内液体,甩干,洗板 5 次,方法同步骤 4。 7、 每孔加 TMB 底物溶液 90μL,酶标板覆膜,37℃ 避光显色(反应时间控制在 10-20 分钟,不要超过 30 分钟。当标准孔的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色,后 3-4 孔梯度 不明显时,即可终止)。 8、 每孔加终止溶液 50μL,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与 底物溶液的加入顺序相同。如出现颜色不匀一,请轻轻晃动酶标板以使溶液混合均匀。 9、 在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后,立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光 密度值(OD 值)。 |