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首页 >> 科研产品 >>免疫学 >>ELISA Kit >> 大鼠心肌肌钙蛋白I(cTN-I)酶联免疫试剂盒
详细说明

大鼠心肌肌钙蛋白I(cTN-I)酶联免疫试剂盒

价格
2600.00 元/96T
城市
全国
供货数量
10000
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产品编号 MD7291
  • 商品说明
  • 商品参数

本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品I(cTN-I)

1.实验原理:本试剂盒采用竞争法检测样本中心肌肌钙蛋白I(cTN-I)的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本,再加入生物素标记的识别抗原,在37℃下孵育30min,两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物,经PBST洗涤除去未结合的生物素抗原,然后加入亲和素-HRP,在37℃下孵育30min,亲和素-HRP与生物素抗原结合,洗涤后结合的HRP催化TMB(四甲基联苯胺)成蓝色,随后在酸的作用下转化成黄色,在450nm波长下有吸收峰,吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。

QQ截图20200214191640.png

2.试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1


封板膜

2片(48)

2片(96)


密封袋

1

1


酶标包被板

1×48

1×96

长期-20℃

标准品(冻干粉)

2支(定容至150μl)

2支(定容至150μl)

2-8

标准品/样品稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8

生物素抗原(冻干粉)

1支(稀释到3ml)

1支(稀释到6ml)

长期-20℃

亲和素-HRP(浓缩液)

50μl(稀释到3ml)

100μl (稀释到6ml)

长期-20℃

生物素抗原稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8

亲和素-HRP稀释液

2.95ml×1瓶

5.9ml×1瓶

2-8

显色剂A液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8

显色剂B液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8

浓缩洗涤液

(20ml*25倍)×1瓶

(20ml*25倍)×1瓶

2-8

备注:

a.              试剂盒中“标准品/样品稀释液”为超纯水(可用双蒸水替代),“终止液”为2MH2SO4,洗涤液为含0.15%吐温-20PBST,如不够可自行配制。

b.不同公司的缓冲体系存在较大差异,请勿将本试剂盒的试剂与其他公司的试剂混用以免影响实验结果。

c.浓缩洗涤液在低温下会有少量盐类析出,稍微加温后即会消失,不影响使用。

d. 浓缩生物素抗原和浓缩亲和素-HRP稀释前务必先离心同时应避免反复冻融

3.试剂盒保存

本试剂盒可以在2-8℃下保存6个月,在-20℃下可以保存更长的时间。酶标板为真空包装,板条可以拆卸,拆开以后如一次不能用完,请放入提供的密封袋中,放入干燥剂,2-8℃保存,在一个月之内仍然有效。试剂不能反复冻融。

4需要而未提供的试剂和器材

1.37℃恒温箱。

2.标准规格酶标仪。

3.精密移液器及一次性吸头

4.双蒸水或超纯水

5.干净的试管或Eppendof管

6.吸水纸

7.自动洗板机或8道排枪

8.ELISA数据处理软件,推荐使用ELISACalc

9.500ml烧杯的和适当量程的量筒

5试剂准备

a.     使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。

b.     本试剂盒可以直接加样,如浓度过高,可以进行适当比例的稀释(推荐2-5倍稀释),计算时应将结果乘以稀释的倍数。

c.      洗涤液为25倍浓缩液,使用前将所有洗涤液倒入500ml1L的烧杯中,用双蒸水定容到500ml即为工作液。

d.     标准品的稀释:先用标准品/样品稀释液将标准品冻干粉定容到150μl,然后漩涡混匀30秒即为标准品原液(24小时内用完)。取5支干净的Eppendorf管,每管加150μl的标准品稀释液,分别标记上800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L,50 ng/L(原液1600ng/L).150μl标准品原液加入标记800ng/L 的管中,混匀后同样取出150μl,加入下一管,以此类推直至最后一管。零孔:直接加标准品/样品稀释液。

e.生物素抗原的稀释:抽取生物素抗原稀释液1ml浓缩型生物素抗原中,漩涡混匀15秒至冻干粉完全溶解,然后将所有液体移入稀释液瓶中,再次漩涡混匀30秒即为生物素抗原工作液。

f.亲和素-HRP的稀释:低速离心(使浓缩液全部沉到管底),将浓缩亲和素-HRP全部移入相应稀释液中然后漩涡混匀30秒即为亲和素-HRP工作液。

6样本前处理

a.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
b.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
c.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
d.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
e.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
f.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

7洗板方法

a.     手工洗板:先洗去酶标孔中的的液体,在吸水纸上拍干,然后每孔加入300μl稀释好的洗涤液,轻轻摇晃30秒,然后甩掉,在吸水纸上拍干,重复4-5次。

b.     洗板机洗板:洗板机洗板比较便捷,但应操作熟练后使用。

8详细操作程序

a.     使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。

b.     空白孔不加样,只加显色剂AB和终止液用于调零。

c.      标准品孔:每孔加入稀释好的标准品50μl,零孔加入标准品/样品稀释液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必须要做,并将其作为标曲的最后一个点)

d.     样品孔:加入样品50μl(推荐直接加样,浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍),然后加入生物素抗原工作液50μl

e.      轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min

f.       25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。

g.     第一次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

h.     加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中,轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min

i.       第二次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

j.       显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

k.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色).

l.        测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

计算:根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程,建议用专用计算软件进行计算,推荐使用ELISAcalc进行计算,拟合模型选用logistic曲线(四参数)。标曲示意图如下:

浓度

Blank

S5

S4

S3

S2

S1

S0

OD

VB

V5

V4

V3

V2

V1

V0

校准值

VB-VB

V5-VB

V4-VB

V3-VB

V2-VB

V1-VB

V0-VB

QQ截图20200214191641.png

QQ截图20200214191916.png

10性能参数

a.     批内差:CV10%

b.     批间差:CV12%

c.      灵敏度:10ng/L

d. 保存:    2-8℃

e. 规格:    96T/盒

有效期:  6个月(2-8℃)。



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