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详细说明

2XPCR MasterMix

价格
¥150 1ml
城市
全国
供货数量
10000
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产品编号 MD2580
  • 商品说明

1.1.融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将2X PCR Master Mix置于冰浴上或冰盒内。

1.2.参考下表在冰浴上设置PCR反应体系:

试剂

最终浓度

体积

体积

双蒸水或Milli-Q水

-

(21-x)μl

(8.4-y)μl

模板DNA

10pg-1μg*

xμl

yμl

引物混合物(10μM each)

0.8μM

4μl

1.6μl

2X PCR Master Mix

1X

25μl

10μl

总体积

-

50μl

20μl

*对于不同类型的模板在50μl反应体积中推荐用量如下:

哺乳动物基因组DNA:0.1-1μg;大肠杆菌基因组DNA:10-100ng;质粒DNA:0.1-10ng。过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。

1.3.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,室温离心数秒,使液体积聚于管底。

1.4.如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖,则在管内滴入一滴矿物油(mineral oil,ST275)。

1.5.把设置好的PCR反应体系置于PCR仪上,开始PCR反应。

2.注意:

1.PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。

2.STEP4(延伸)的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置,通常每kb产物的延伸时间为1分钟。例如PCR产物的长度为1kb,则延伸时间可以设置为1分钟,PCR产物的长度为2kb,则延伸时间可以设置为2分钟,以此类推。

3.对于初次进行的PCR,为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物,可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化,使PCR反应没有达到平台期。


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