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详细说明

DNA Marker Ⅱ

价格
¥80 250μl(50次)
城市
全国
供货数量
10000
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产品编号 MD22
  • 产品说明
  • 产品参数
(100,300,500,700,900,1200bp)
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2. 也不需要乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。3. 独有的裂解液配方,可直接裂解全血,不需要先裂解去除红细胞。4. 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.0,基本无DNA残留,可用于RNAi,RT-PCR,Northern-blot和各种实验。实验步骤:v 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)? 提示:一次使用前请先在Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入指定量乙醇!1. 每0.25ml液体样品(血清,血浆,脑脊液等等)加入0.75ml Lysis buffer,用加样枪吹打液体样品几次以帮助裂解样品中细胞。每5~10×106个细胞至少加入0.75ml Lysis buffer。对于含有高污染物样品如全血样品,可以用灭菌水按照1:1比例稀释一倍后开始提取。Lysis buffer和液体样品的终体积比总是3:1。2. 将样品剧烈震荡混匀,在15 -30°C条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。3. 每0.75ml Lysis buffer加0.2 ml氯仿,剧烈振荡15秒并室温下放置2分钟。4. 于4℃12,000rpm 离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加Lysis buffer体积的70%。5. 小心取上清(精确计算体积)转入到新的离心管,加入1.5倍体积的无水乙醇(必须是室温的),涡旋混匀。此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心,立刻接下步。6. 将混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000 rpm离心30-60秒,弃掉废液。7. 加700μl Wash Solution 1(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。8. 加入500μl Wash Solution 2/3(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μl Wash Solution 2/3,重复一遍。9. 将吸附柱RA放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。10. 取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water(事先在 100℃水浴中预热效果更好), 室温放置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。11. 如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl RNase free water重复步骤11, 合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高, 分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高1 5–30%, 但是浓度要低,用户根据需要选择。附:微小RNA富集方法1. 按照前面标准操作步骤1-4操作,直到得到上清。2. 精确估计上清体积,加入1/3体积无水乙醇(必须是室温的),涡旋或者吹打充分混匀,不要离心。3. 将混合物加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000 rpm离心30-60秒,收集滤过物。如果混合物大于700μl,则应该先加700μl离心,将滤过物从收集管转移到一个新的离心管后,把吸附柱子放回空的收集管内,再加入剩下的混合物,离心,合并两次滤过物,计算体积。此时,滤过物含有微小RNA, 柱子上面是除去了微小RNA的总RNA,如果需要,可以按照前面标准操作步骤7-10操作漂洗,洗脱回收得到去除了微小RNA的总RNA。4. 精确估计滤过物体积,加入2/3体积无水乙醇(必须是室温的),涡旋或者吹打充分混匀,不要离心。5. 取一套新的离心吸附柱子RA, 将上一步骤混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000 rpm离心30秒,弃掉废液。6. 按照前面标准操作步骤7-10操作漂洗,洗脱得到富集的微小RNA。
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